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真空冷凍干燥機(jī):助力豬血中提取抗菌肽

點(diǎn)擊次數(shù):2641    更新時(shí)間:2016-07-25

真空冷凍干燥機(jī):助力豬血中提取抗菌肽

血液真空冷凍干燥機(jī)

  由于真空冷凍干燥機(jī)具有其它干燥方法*的優(yōu)點(diǎn),因此真空冷凍干燥機(jī)一直以來(lái)越來(lái)越受到人們的青睞,在醫(yī)藥、生物制品和食品、化工方面的應(yīng)用已日益廣泛。

  利用真空冷凍干燥機(jī)從豬血中提取抗菌肽,屬于天然提取物,具有天然、無(wú)毒、無(wú)污染、無(wú)殘留、*、抗菌等特點(diǎn),是一種新型的綠色抗微生物藥物。

  利用真空冷凍干燥機(jī)從豬血中提取抗菌肽,它包括以下具體步驟:

  (1)豬血采集:從屠宰場(chǎng)采取新鮮豬血2-3L,使用5%檸檬酸鈉抗凝;

  (2)萃取溶液:將新鮮豬血放置37℃溫箱靜置L_2h取上清,按照1:4的比例加入0.84%氯化銨溶液,混勻靜置3min,常溫400r/Min,離心10min,棄上清按比例加入氯化銨溶液混勻靜置3min,再次500r/Min離心10min ;棄上清,使沉淀與少量冷的生理鹽水,即4℃的生理鹽水短時(shí)間混合,再用200ml冷的10%冰醋酸,即4℃的10%冰醋酸使沉淀懸浮,充分混勻,倒入50ml燒杯,超聲波處理50次,然后溶液使用磁力攪拌器混勻攪動(dòng)于4℃下萃取一夜;次日,將萃取的溶液取出15000r/Min離心30min,取上清4℃下保存,沉淀再次混懸于冷的10%醋酸中,充分混勻,混勻攪動(dòng)于4℃下萃取一夜;第三天將萃取的溶液取出15000r/Min離心30min,zui后將溶液4℃下保存;

  (3)溶液除酸、濃縮、凍干:合并所保存的溶液,將溶液注入透析袋,扎緊袋口,然后將其放入燒杯,再向燒杯中倒入蒸餾水,蒸餾水液面要超過(guò)透析袋,4℃下透析除酸,每12h換水一次,直至透析袋外蒸餾水PH大于6,將透析袋放入瓷盤(pán)中,撒上聚乙二醇6000,透析濃縮約3-4h后即可將透析袋取出,將濃縮的溶液取出,放進(jìn)真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)真空低溫凍干,轉(zhuǎn)移至青霉素小瓶中,密封-20℃保存;

  (4)抗菌肽的分離:將凍干樣品用0.5%甲醇溶解,再上樣于層析柱葡聚糖凝膠SephadexG25,同時(shí)打開(kāi)柱的下端出口,注意控制流速為L(zhǎng)mL/Min,5mL/管;用部分收集器收集洗脫液,5mL/管,收集的溶液用紫外分光光度計(jì)測(cè)其在280nm處的吸收值,將在280nm處有吸收的溶液分裝于青霉素瓶中,再在真空冷凍干燥機(jī)中低溫凍干,-80℃保存;取各瓶?jī)龈杀4娴臉悠犯?0mg,分別溶于滅菌雙蒸水中,無(wú)菌條件下用微孔濾膜過(guò)濾樣品,將藥敏紙片浸泡于過(guò)濾后的樣品中,浸泡一個(gè)晚上后,用平皿紙片法初篩,收集具有抗菌活性的組分,置于5℃保存;

  (5)抗菌肽的純化與濃縮:使用超濾裝置進(jìn)行超濾,膜包選用截流分子量為20kD。洗脫液選用0.5%甲醇溶液,濾出液既為所要獲得的溶液。

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